Молекулярна детекція та описова епідеміологія інфекції пташиного аденовірусу у курей-бройлерів

Анотація

Пташині аденовіруси належать до епідеміологічно важливих вірусних патогенів, широко поширених у промисловому птахівництві в усьому світі, та є етіологічними факторами низки тяжких захворювань, що завдають суттєвих економічних збитків господарствам бройлерного типу. Це дослідження було проведено з метою встановлення чітких молекулярних доказів наявності збудника пташиного аденовірусу у курчат-бройлерів у комерційних господарствах провінції Діяла за допомогою оптимізованої полімеразної ланцюгової реакції в реальному часі, а також математичного моделювання меж його регіонального поширення. Для цього септичн відібрано 96 клінічних зразків тканин печінки від 32-добових курчат- бройлерів із клінічними ознаками печінкової дисфункції на різних приватних підприємствах. Після обробки та лізису тканин вірусну геномну ДНК ізолювали за допомогою стандартних екстракційних матриць на основі силікагелевих мембран. Молекулярний скринінг виконували за допомогою платформи якісної ПЛР у реальному часі з використанням специфічних олігонуклеотидних праймерів (L1-F: 5′-GACGGCATTTGGGGAGGAATT-3′ та L1-R: 5′-GCTGAGGATTGAGCTTCACCC-3′), спрямованих на гіперваріабельну ділянку петлі L1 гена гексону вірусу, з подальшим безперервним аналізом градієнта дисоціації після ампліфікації від 58°C до 95°C. Дослідженнями встановлено, що із загальної кількості досліджуваних зразків 20 вивилися позитивно реагуючими, що дало змогу встановити регіональний рівень поширеності вірусної інфекції на рівні 20,8 %. Описове статистичне моделювання дисперсії успішно спрогнозувало межі істинного очікуваного поширення в межах стабільного 95 % довірчого інтервалу від 12,7 до 28,9 % при розрахунковій стандартній похибці 4,14. Крім того, непараметричний критерій згоди Хі-квадрат продемонстрував інтенсивне, високозначуще відхилення від теоретичних рівномірних частот (χ² = 32,66, df = 1, P < 0,001), визначаючи високу активність циркуляції патогену в регіональній системі птахівництва, попри статистичне переважання негативних зразків (79,2 %). Зафіксовані кінетичні графіки ампліфікації продемонстрували швидку експоненціальну появу сигналу флуоресценції між 15 і 22 циклами, тоді як оцінка кривої плавлення виявила чіткі, поодинокі піки дисоціації, центровані приблизно на 85°C, що підтверджує абсолютну специфічність амплікону та повну відсутність артефактів праймер-димерів або неспецифічних продуктів переносу. Отримані дані визначають, що циркуляція пташиного аденовірусу чітко встановлена зі значною частотою в регіональних птахівничих мережах, підтверджуючи, що ПЛР у реальному часі залишається винятково швидким, високоточним і надійним інструментом діагностичного скринінгу для раннього епідеміологічного картування.